BSA ELISA试剂盒

产品亮点

超高的灵敏度

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产品检测灵敏度LoB=0.14 ng/ml, LoQ=0.5 ng/ml

准确性好

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• 回收率80%-120%，检测数据准确，受基质影响小
• 精密度好，批内和批间CV<10%

标准品可靠

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内含国家标准品，定标准确

稳定性好

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有效期大于12个月

产品列表

检测原理

• BSA ELISA试剂盒

  BSA ELISA试剂盒利用了两种抗牛血清白蛋白（BSA）的抗体，它们可与BSA的不同表位结合。

  当标准品或样品加入捕获板时，BSA蛋白可以被包被在捕获板上的抗BSA抗体捕获。然后在体系中加入与生物素结合的抗BSA检测抗体，该检测抗体可以与捕获板上结合的BSA相互作用。随后添加的链霉亲和素-辣根过氧化物酶偶联物 (Streptavidin-HRP) 可与生物素偶联的抗BSA抗体 (Biotin Anti-BSA Antibody) 相互作用。在洗涤步骤后，加入 3,3‘,5,5’-四甲基联苯胺溶液（TMB溶液），可在体系中形成蓝色复合物。通过添加终止溶液终止反应。终止溶液可使的体系颜色从蓝色变为黄色。颜色的强度可以通过酶标仪在 450 nm和650 nm处读取。测试样品中BSA的浓度可根据BSA标准曲线实现精准定量。

  

  图 1. BSA ELISA试剂盒检测原理

验证数据

• 高准确度和回收率

  回收率用于确定分析物检测是否受样品基质差异的影响，通过将已知量的分析物加标到不同的样品基质中来验证回收率。以下是根据具有代表性的准确度验证生成的报告和数据示例，在这项验证中，使用3批次试剂盒（GenScript，L00976），将20 ng/mL的分析物加标到基质中混合验证回收率，样本重复测量3次。

  表 1. 三批次试剂盒回收率测试结果

  批次	重复次数	平均测值（ng/mL）	回收率
  			实测
  #1	3	20.21	101%
  #2	3	19.42	100%
  #3	3	18.44	111%

• 高批内批间精密度

  A. 批内精密度/重复性

  批内精密度验证体现测定板内每孔之间的重复性，有助于确保在测定板的不同孔中运行样本检测可以给出可靠的结果。
  以下是根据具有代表性的批内精密度验证生成的报告和数据示例，在这项验证中，使用试剂盒（GenScript，L00976）分别对低、中、高3个浓度水平的样本进行测试，每个样本各重复检测10次，计算变异系数(CV)。

  表 2-1. 三批次试剂盒批内精密度验证结果

  批次编号	重复次数	平均测值（ng/mL）	%CV
  			实测
  #1	10	2.03	5%
  #1	10	14.07	5%
  #1	10	21.47	5%
  #2	10	2.06	8%
  #2	10	15.36	10%
  #2	10	23.34	9%
  #3	10	2.09	8%
  #3	10	13.45	8%
  #3	10	21.42	8%

  B. 批间精密度

  批间精密度体现同一样品在多批测定间的重现性，有助于确保在不同批次试剂盒中运行样本检测可以给出可靠的结果。
  以下是根据具有代表性的批间精密度验证生成的报告和数据示例，在这项验证中，使用3个不同批次试剂盒（GenScript，L00976）分别对低、中、高3个浓度水平的样本进行测试，每个样本各重复检测10次，每个样本计算30次，测量浓度结果和变异系数(CV)。

  表 2-2. 三批次试剂盒批间差验证结果

  批次数量	重复次数	平均测值（ng/mL）	%CV
  			实测
  3	3x10	2.1	7%
  3	3x10	14.3	9%
  3	3x10	22.1	8%

• 线性

  线性是相对于基于标准曲线计算的分析物量定义的。线性验证实验提供了样本在不同稀释水平下测试的精度信息，有助于确保在分析的动态范围内试剂盒能够准确测量分析物浓度。
  以下是根据具有代表性的线性验证生成的报告和数据示例，在这项验证中，对样本稀释至测定范围，使用试剂盒（GenScript，L00976）对其进行测定，每个样本重复检测3次，计算其浓度的平均值，将结果的平均值和理论值进行直线拟合，并计算线性相关系数r。

  表 3. 试剂盒线性验证结果

  重复次数	预期理论值 （ng/mL）	平均测值 （ng/mL）	测值/预期 %	线性 r
  3	2	2.24	112%	＞0.999
  3	3.15	2.92	93%
  3	6.25	7.27	116%
  3	13.5	12.65	94%
  3	25	22.47	90%

• 专属性

  向中浓度样本及空白基质中添加不同浓度的HSA(人血清白蛋白)，考察方法的专属性。上表是使用BSA ELISA检测试剂盒(货号:L00976)，根据具有代表性的交叉干扰验证生成的数据示例。结果显示，20 mg/mL的HAS对检测不会造成明显影响。

  表 4. 试剂盒特异性验证结果

  加标HSA 浓度 (mg/mL)	BSA 理论测值 (ng/mL)	BSA 实际测值 (ng/mL)	回收率 (%)
  20	8	6.5	81
  10	8	6.8	83
  1	8	7.7	96
  0.1	8	8.5	107

• 钩状效应

  钩状效应是指在一定的浓度范围内，分析物的浓度与检测信号值呈正比，但当分析物超过某一浓度界限后，信号值反而随着浓度的增高而下降的现象。以下是根据具有代表性的钩状效应生成的报告和数据示例，在这项验证中，使用3批次试剂盒（GenScript，L00976）对其测定出现钩状效应的浓度限。

  表 5. 试剂盒钩状效应（Hook效应）验证结果

  批次编号	浓度限（µg/mL）
  #1	35
  #2	30
  #3	30

常见问题解答

• 如何避免BSA污染？
  • 向酶标板中加入每种试剂时，都应悬空加入，以防止移液器吸头插入造成污染。
  • 确保实验操作环境、离心管和移液器吸头没有BSA污染。过滤式移液器吸头可以有效防止BSA污染。
  • 在BSA检测中，每次洗涤后使用的吸水纸用后都需要丢弃，更换新的吸水纸以备下次洗涤后使用，以避免BSA污染。
  • 由于本实验存在潜在的污染风险，操作人员必须特别小心。如果手套接触到其他实验的试剂，则必须在进行该BSA检测之前更换手套以防止污染。

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