案例1. 慢病毒感染实验
第二代病毒系统
第三代病毒系统
第三代病毒系统
其它公司
分别使用优化的三代病毒包装系统,二代病毒包装系统以及其他公司的包装系统进行EGFP慢病毒包装,测定滴度后调整成相同的MOI去感染等量的293T细胞,感染后72小时进行荧光拍照。升级后的三代系统感染效率最高。
案例2. GFP病毒感染Jurkat MOI测试
MOI | GFP% | 感染时间 |
---|---|---|
10 | 17.1% | 72h |
20 | 26.1% | 72h |
40 | 41.6% | 72h |
80 | 60.1% | 72h |
注:Jurkat细胞是一种难转导的T淋巴细胞。使用第三代质粒系统包装GFP病毒感染Jurkat细胞,经过测试,在MOI=80时,感染率达到60.1%。
案例3. GFP病毒感染BaF3测试
MOI=500
MOI=1000
MOI=2000
BaF3(鼠源B淋巴细胞)是一种极难转染的细胞。使用第三代质粒系统包装GFP病毒进行感染实验。 在24孔板加入2x105细胞,3x108TU/mL病毒(MOI分别设置为500/1000/2000)以及8μg/ml的polybrene,感染24h后换液,48h后进行荧光拍照。
结果显示,在MOI=500时,感染效率超过80%。
案例4. 慢病毒包装系统基因承载长度测试
Gene name | Target gene length | Titer(x10^6TU/mL) |
---|---|---|
Gene 1 | 3773 bps | 343.0155 |
Gene 2 | 4698 bps | 358.6088 |
Gene 3 | 5498 bps | 184.6572 |
Gene 4 | 6622 bps | 261.1701 |
注:一般情况下,目的基因长度超过3000bps就很难达到高滴度水平,甚至无法包装。的慢病毒包装系统最高可达到6.6kb。对于常规基因,即GC含量适中,没有复杂重复序列,不引起细胞致死等,5kb以内长度,均可保证108TU/mL的滴度。